一、酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)代測,小鼠IL-1β酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)代測參數(shù)規(guī)格
保存條件:2-8℃低溫保存
保質(zhì)期:6個(gè)月,所有試劑盒均提供批次。
試劑盒成分:酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等。
二、選型
產(chǎn)品規(guī)格:96T/48T
96T指可以做94個(gè)標(biāo)本-2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照-84個(gè)樣本
48T指可以做47個(gè)標(biāo)本-1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照-42個(gè)樣本
三、酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、牽9體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實(shí)際應(yīng)用中,通過不同的設(shè)計(jì),具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法(圖a)、用于檢測抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。
四、酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)代測,小鼠IL-1β酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)代測優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)
Elisa技術(shù)在上述方面表現(xiàn)出如下*性:
(一)靈敏度高
雖然酶活性調(diào)節(jié)Elisa方法的靈敏度目前并不十分理想,但在酶活性放大Elisa中,檢測的靈敏度遠(yuǎn)比RIA高。根據(jù)質(zhì)量作用定律。即免疫反應(yīng)所形成的免疫復(fù)合物量與反應(yīng)物濃度成正比。推測所檢測的待測物分子數(shù)為1。已知1個(gè)摩爾濃度含6.02×1023個(gè)分子,那么理論推測酶活性放大Elisa方法的zui低檢測限可達(dá)1.7×10-24mol/L。雖然在實(shí)際應(yīng)用中由于反應(yīng)條件和試劑純度以及儀器精度等因素的影響,往往達(dá)不到這個(gè)水平(大于104個(gè)分子),但表明Elisa在靈敏度方面的改進(jìn)潛力是很大的。
(二)特異性強(qiáng)
從免疫反應(yīng)的角度來說,Elisa與RIA的特異性應(yīng)該是*的。但在Elisa方法中,由于作用檢測指示劑的酶與其底物的反應(yīng)有專一性,從而增加了該方法的特異性。
(三)對(duì)儀器設(shè)備要求不高,測定成本低
Elisa測定在普通實(shí)驗(yàn)室便可進(jìn)行,常用的儀器設(shè)備包括加樣器、培養(yǎng)箱、酶標(biāo)讀數(shù)器等。按現(xiàn)有價(jià)格折算,酶標(biāo)儀的價(jià)格只及液閃儀的1/6至1/4,因此每測定一個(gè)樣本所需成本不及PIA的1/10至1/16。某些定性Elisa方法,還可在野外進(jìn)行,操作十分方便。
(四)方法快速、簡便
均質(zhì)酶免疫測定方法操作時(shí),所有反應(yīng)試劑均在同一體系內(nèi)進(jìn)行,不需任何分離步驟,操作十分簡便、快速,數(shù)分鐘便能得出結(jié)果。某些定性Elisa試劑盒,如國外生產(chǎn)的某些奶牛fa情鑒定和ren娠診斷Elisa試劑盒,數(shù)分鐘時(shí)間便能完成一次測定。
(五)試劑保存時(shí)間較長
作為檢測指示劑用的酶和酶標(biāo)記物,在低溫或干燥條件下相對(duì)穩(wěn)定,可保存半年至數(shù)年之久。
(六)自動(dòng)化程度高
Elisa由于不存在放射性同位素污染,因此,除加待測樣本需要人工操作外,其他各步驟均可用儀器自動(dòng)化完成。在這種自動(dòng)化條件下,平均每人每天可完成2000余個(gè)樣本的檢測工作。
(七)方法種類多
Elisa技術(shù)可以充分利用單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn),并能利用某些非免疫反應(yīng)試劑(如SPA、凝集素等)的作用,發(fā)展成為許多新方法。此外,發(fā)展Elisa技術(shù)還可以從酶及其底物兩方面著手。這是因?yàn)椋?,用于Elisa技術(shù)的酶其種類遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于可用作RIA檢測指示劑的放射性同位素。生物界的酶多種多樣,有希望開發(fā)很多類型的酶用于Elisa,并建立相應(yīng)的Elisa方法。相反,自然界的化學(xué)元素是有限的,放射性同位素的種類更加有限。第二,由于酶的多樣性,酶作用底物也有多種多樣,與此相對(duì)應(yīng)的生色源或供氫體的種類也有遠(yuǎn)大的開發(fā)和發(fā)展?jié)摿Α?/span>
(八)無放射性同位素污染
Elisa技術(shù)應(yīng)用酶促反應(yīng)作為檢測免疫反應(yīng)強(qiáng)度的依據(jù),在終端測定中毋須接觸放射性同位素,根本不存在放射性污染問題(某些為提高檢測靈敏度而建立的酶免疫放射底物方法除外)。
鑒于Elisa技術(shù)與RIA技術(shù)相比具有以上8個(gè)方面的*性,尤其在污染和操作簡便性方面,Elisa技術(shù)所具有的長處有利于該項(xiàng)技術(shù)在生產(chǎn)和臨床實(shí)踐中推廣應(yīng)用。統(tǒng)計(jì)資料表明,盡管RIA技術(shù)比Elisa技術(shù)早5年誕生,但在生產(chǎn)實(shí)踐中的應(yīng)用還不及Elisa技術(shù)普及。原子能機(jī)構(gòu)在推廣應(yīng)用核技術(shù)的同時(shí),也在推廣非放射性同位素標(biāo)記技術(shù),以縮小“核擴(kuò)散”范圍。預(yù)計(jì)在將來,Elisa技術(shù)有逐漸取代RIA技術(shù)的趨勢(shì)。
五、酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)代測,小鼠IL-1β酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)代測注意事項(xiàng)
1. 當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩,避免起泡。
2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。
3. 一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請(qǐng)每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。
5. 如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高,請(qǐng)先稀釋后再測定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)。
6. 在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液工作液時(shí),請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。
7. 底物請(qǐng)避光保存。
8. 不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。